宿主残留蛋白HCP ELISA抗体覆盖率检测的应用

发布日期：2021-03-09 17:31 浏览量：

现今许多生物药物（抗体、疫苗、重组蛋白等）的制备还是通过生物体系合成，诸如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，大肠杆菌等，这些细胞称为宿主细胞。尽管已经采用多种纯化方式，但是在生物药物中还是可能会有微量的宿主蛋白残留（HCP）。由于HCP残留可能对生物药物的安全性和药效性能产生一定影响，因此，精准的HCP检测对于控制生物药物的质量和安全尤为重要。如：

目前，检测HCP应用最广泛、最有实用价值的方法就是采用ELISA方法，它检测的是总HCP组分，重复性好，灵敏度高，便于设定检测限度和建立技术规范。但是ELISA方法检测也有一定的局限性，比如HCP成分不一，每一种蛋白成分含量也不一致，作为免疫原产生抗体的能力也不相同，所以由此制备的抗HCP抗体并不能完全检测HCP中所有成分，因此会有“漏检”，所以需要评估HCP ELISA抗体的覆盖率（Coverage）。

HCP ELISA抗体覆盖率的评估方法一般会采用双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）和蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）技术结合的办法。将分别得到的HCP总蛋白分离图像和HCP抗体结合的图像放在一起叠加、匹配胶点、分别记录匹配和未匹配的胶点数量，计算覆盖率结果。现在还会使用2D-DIGE技术进行HCP抗体覆盖率的检测，例如使用cy3标记总蛋白，使用cy5标记的anti-HCP的二抗，这样最后可以最后一起检测，不用跑两块胶，节省时间和试剂花费成本等。

美国Azure公司的 Sapphire™ 双模式多光谱激光成像系统，专业技术，带来高质量检测结果。配有四激光，RGB三色激光即可进行2D和2D-DIGE的检测，大平台，检测更顺畅，仪器可进行分辨率，激光强度，聚焦深度的设置，特别是聚焦，采用激光共聚焦光路，减少样品表面灰尘等的干扰，提高信噪比，检测更灵敏。

除了上面的应用，sapphire还可检测多种样品类型-包括膜/PAGE胶/同位素标记样品/琼脂糖凝胶/培养皿/96孔板/微阵列芯片/组织切片等等。